條件培養(yǎng)基（conditioned medium）指的是將培養(yǎng)過細(xì)胞的培養(yǎng)基除細(xì)胞取得的上清液，可用于分析、培養(yǎng)其他細(xì)胞或作為其他細(xì)胞培養(yǎng)基的添加成分。
將條件培養(yǎng)基用于ELISA分析時(shí)，操作如下：
1. 將細(xì)胞置于完全（含血清）生長培養(yǎng)基中，使細(xì)胞增殖至所需的融合水平。
2. 去除生長培養(yǎng)基，用幾毫升溫PBS輕柔地清洗。重復(fù)清洗步驟。
3. 去除最后一次PBS洗滌液，加入無血清生長培養(yǎng)基。孵育 1-2 天。
4. 移取培養(yǎng)基至離心管中，以合適的轉(zhuǎn)速離心5-10 min。
5. 立即用于實(shí)驗(yàn)或?qū)⑸锨逡悍盅b保存。盡量減少凍融循環(huán)。
本篇樣本處理方法旨在作為一般參考，具體方案因樣本類型而異，需要您根據(jù)參考文獻(xiàn)并自行驗(yàn)證決定，從而選擇更適合自己樣本的處理方案。
以下提供部分樣本處理案例：
小鼠巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)分析（來源：Bio-protocol）
收集用于測定細(xì)胞因子產(chǎn)生的條件培養(yǎng)基
1. 在收集由巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基之前，觀察培養(yǎng)物，驗(yàn)證相關(guān)細(xì)胞是否被適當(dāng)激活（圖1所示） 注意：用LPS刺激的J774A.1巨噬細(xì)胞看起來比未刺激的巨噬細(xì)胞更大，更扁平。
圖1：巨噬細(xì)胞形態(tài)對 LPS 的反應(yīng)變化。未經(jīng)處理的巨噬細(xì)胞（左）和LPS刺激 18 小時(shí)的巨噬細(xì)胞（右）的明場圖像。比例尺=50 μm
2. 收集培養(yǎng)基，并將其置于1.5ml微量離心管中。
3. 以500×g/轉(zhuǎn)速，室溫下（RT）離心樣品5 min。
4. 將離心后的上清液轉(zhuǎn)移到新的1.5ml試管中。
注意事項(xiàng)：A)雖然細(xì)胞沉淀不應(yīng)該可見，但是在去除上清液時(shí)，應(yīng)避免（槍頭等儀器耗材）接觸管底。B)樣品可立即用于ELISA測定，或分裝保存于-80℃。
5. 按照供應(yīng)商提供的說明進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
參考文獻(xiàn)
Bartosh, T. J. and Ylostalo, J. H. (2014). Macrophage Inflammatory Assay. Bio-protocol 4(14): e1180. DOI: 10.21769/BioProtoc.1180.
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